În chimie, diluarea este procesul de reducere a concentrației unei substanțe într-o soluție. Diluarea în lanț este diluarea repetată a unei soluții pentru a crește rapid factorul de diluare. Această procedură se efectuează de obicei în experimente care necesită soluții foarte diluate cu precizie ridicată. De exemplu, experimente care implică curbe de concentrație pe o scară logaritmică sau experimente pentru a determina densitatea bacteriilor. Diluțiile în lanț sunt utilizate pe scară largă în experimentele științifice, cum ar fi biochimia, microbiologia, farmacologia și fizica.
Etapa
Metoda 1 din 2: Efectuarea diluării de bază
Pasul 1. Determinați soluția de diluant adecvată
Este foarte important să se determine lichidul care trebuie utilizat pentru diluare. Multe soluții sunt solubile în apă distilată, dar acest lucru nu este întotdeauna cazul. Dacă diluați bacterii sau alte celule, faceți acest lucru pe un mediu de cultură. Lichidul pe care îl alegeți va fi utilizat pentru toate diluțiile lanțului.
Dacă aveți îndoieli cu privire la diluantul de utilizat, căutați ajutor sau căutați online. Căutați exemple de la alții care au făcut diluții în lanț similare
Pasul 2. Pregătiți un număr de eprubete care conțin 9 ml de diluant
Eprubetele sunt utilizate pentru diluții goale. Mai întâi, puneți proba nediluată în primul tub, apoi faceți diluțiile în succesiune cu tuburile următoare.
- Etichetați toate tuburile utilizate înainte de a începe diluarea, astfel încât să nu vă confundați odată ce experimentul rulează.
- Fiecare tub va fi umplut cu 10 diluții, pornind de la tubul a cărui substanță nu a fost diluată. Diluarea în primul tub este 1:10, urmată de 1: 100 în al doilea tub, 1: 1000 pentru al treilea și așa mai departe. Determinați cantitatea de diluție care trebuie efectuată în avans, astfel încât să nu risipiți soluția de diluant.
Pasul 3. Pregătiți o eprubetă care conține cel puțin 2 ml de soluție nediluată
Cantitatea minimă de soluție care trebuie diluată necesară pentru efectuarea acestei diluții în lanț este de 1 ml. Dacă utilizați doar 1 ml, nu va rămâne nicio soluție nediluată. Eticheta BLM pentru soluții nediluate.
Amestecați bine soluția înainte de a începe orice diluare
Pasul 4. Efectuați prima diluare
Se ia 1 mL de soluție nediluată din eprubeta BLM cu o pipetă și se introduce într-o eprubetă etichetată 1:10 conținând 9 mL de diluant, apoi se amestecă bine. Acum există 1 ml de soluție nediluată în 9 ml de diluant. Astfel, soluția a fost diluată cu un factor de diluție de 10.
Pasul 5. Efectuați a doua diluare
Pentru a doua diluare, luați 1 mL de soluție din tubul 1:10, apoi introduceți-l în tubul 1: 100 care conține și 9 mL de diluant. Asigurați-vă că soluția din tubul 1:10 este complet amestecată înainte de a o adăuga în tubul următor. Din nou, asigurați-vă că diluarea în tubul 1: 100 este complet amestecată. Soluția din tubul 1:10 a fost diluată de 10 ori în tubul 1: 100.
Pasul 6. Continuați această procedură pentru a efectua diluții mai lungi ale lanțului
Acest proces poate fi repetat de câte ori este necesar pentru a obține concentrația de soluție dorită. În experimentele care utilizează curbe de concentrație, puteți efectua diluții în lanț pentru a produce un număr de soluții cu diluții de 1, 1:10, 1: 100, 1: 1.000.
Metoda 2 din 2: calcularea factorului de diluare și a concentrației finale
Pasul 1. Calculați raportul ultimei diluții din diluția în lanț
Raportul total de diluare poate fi determinat prin înmulțirea factorului de diluare de la fiecare etapă la etapa finală. Ilustrația matematică este cu formula Dt = D1 x D2 x D3 x … x D , Dt este factorul total de diluare și D este raportul diluant.
- De exemplu, să presupunem că faceți o diluție 1:10 de 4 ori. Conectați factorul diluant în formula: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- Factorul de diluant din al patrulea tub din această diluție în lanț este de 1: 10.000. Concentrația substanței după diluare este de 10.000 de ori mai mică decât înainte de a fi diluată.
Pasul 2. Determinați concentrația soluției după diluare
Pentru a determina concentrația finală a unei soluții după o diluare în lanț, trebuie să cunoașteți concentrația inițială a acesteia. Formula este CSfârșit = Cînceput/DCSfârșit este concentrația finală a soluției diluate, Cînceput este concentrația inițială a soluției originale și D este raportul de diluție predeterminat.
- De exemplu: Dacă începeți cu o soluție celulară a cărei concentrație este de 1.000.000 de celule pe ml și raportul de diluție este 1.000, care este concentrația finală a probei diluate?
-
Folosind formula:
- CSfârșit = Cînceput/ D
- CSfârșit = 1.000.000/1.000
- CSfârșit = 1000 de celule per ml.
Pasul 3. Asigurați-vă că toate unitățile sunt la fel
Când efectuați orice calcul, asigurați-vă că unitățile sunt întotdeauna aceleași la sfârșitul calculului. Dacă unitatea inițială este celulele per ml, asigurați-vă că unitățile rămân aceleași la sfârșitul calculului. Dacă concentrația inițială este părți pe milion (bpd), atunci concentrația finală trebuie să fie și în unități bpj.
